Uma máquina virtual se comporta de maneira semelhante a uma máquina real
A virtual machine (VM) is a software implementation of a machine (i.e. a computer) that executes programs like a physical machine. -Wikipedia
Assim, semelhante a uma máquina real quando você termina de instalar um sistema operacional, você remove o disco, da mesma forma, depois de instalar o Windows 7, é possível remover o disco por
Select your Windows 7 VM > Machine > Settings > Storage > Select Disc Drive > Click on the CD icon > Remove disk from virtual drive
Depois, você pode excluir o arquivo .iso e isso não afetará sua máquina virtual.