Sim, você pode. Se você ainda não carregou o arquivo glade, carregue-o com:
builder = gtk.Builder()
builder.add_from_file("/path/to/file")
Substitua "/ caminho / para / arquivo" pelo caminho para o arquivo glade. Você pode então pegar o container como a viewport:
viewport = builder.get_object("nameOfViewport")
Substitua "nameOfViewport" pelo nome que você deu no glade. Você pode então adicionar o widget usando o método add () das portas de visualização:
viewport.add(nameOfWidget)
Substitua "nameOfWidget" pelo nome do widget que você deseja adicionar.
Editar: certifique-se de inicializar o widget com algo como
nameOfWidget = gtk.Label()
para um widget de marcadores.