Selecione B1: B5 e use Validação de dados, Personalizar e escreva o seguinte:
=COUNTIF($B$1:$B$5,"X")=1
Neste caso, você pode escrever X apenas uma vez.
Quando você tentar a segunda vez, uma mensagem aparecerá Repetir, Cancelar, Ajuda
Mas para mover o X para o último lugar, você precisará do VBA
Para escrever X em outra célula, você precisa excluir X da primeira célula