Na janela da máquina: escolha Dispositivos no menu - > Unidades Óticas - > Remover disco da unidade virtual
Em seguida, reinicie a máquina virtual.
(Alternativamente, você pode ir para as configurações da máquina na janela principal do VirtualBox, selecione a guia Armazenamento, realce a unidade óptica, clique em um pequeno ícone de disco e escolha remover)