Você pode, existem várias maneiras, uma implica usar uma imagem iso do VirtualCD que permitirá que você pule para a inicialização via USB; outra implica em criar um disco virtual virtual VMDK que aponte para você HDD externo real (tecnicamente não está inicializando via USB, ele está inicializando de um VirtualHDD cujos setores estão no USB).
Mas se você está pronto para configurar o Grub2, por que diabos você precisa de uma mini distro completa? Basta usar um pequeno 8MiB (também um 2Mib pode ser suficiente) com o Grub2 e colocar no grub.cfg um menu para carregar o sistema operacional do drive USB, todas as unidades (fixas, internas, externas, usb são vistas pelo Grub2 da mesma forma).
Pesquise por grub2-install e parâmetros --boot-directory e --efi-directory (no caso de você querer [U] inicialização por EFI).
Então, dentro do VirtualBOX você só precisa de um pequeno Disco Rígido Virtual (apenas para o Grub2, sem necessidade de um Linux funcional) que inicializará o gerenciador de inicialização Grub2.
Cuidado, se você deseja inicializar o Windows a partir dessa unidade externa, use melhor o truque de criar um disco rígido virtual que aponte para um disco rígido externo real (o arquivo é um vmdk) ... não se esqueça de executar o VirtualBox em elevado (se o host for o Windows).Pesquisa: VirtualBox Boot USB com disco virtual wmdk.
Espero que eu possa ajudar.