De Wikipedia :
ISO disc images are uncompressed and do not use a particular container format; they are a sector-by-sector copy of the data on an optical disc, stored inside a binary file. ISO images are expected to contain the binary image of an optical media file system (usually ISO 9660 and its extensions or UDF), including the data in its files in binary format, copied exactly as they were stored on the disc. The data inside the ISO image will be structured according to the file system that was used on the optical disc from which it was created.
Como uma imagem ISO é uma cópia exata de um disco por setor, as informações sobre se ela é ou não inicializável são armazenadas no próprio arquivo.
Em outras palavras, grave o ISO em um disco e tente inicializar a partir dele. Se não inicializar, não foi planejado para ser usado dessa maneira.
Nota: Se você está tentando criar um ISO inicializável usando CDBurnXP (meu software de criação de discos grátis de escolha), então você pode fazer isso a partir do disco - > Opções de inicialização .. menu que abrirá o seguinte diálogo:
A