O Windows 7 e versões posteriores removeram o suporte para executar aplicativos DOS no "modo nativo". No Windows 7, você tinha a opção "Windows XP Mode", que era uma máquina virtual executando o Windows XP, que podia executar aplicativos legados do DOS. Embora as máquinas virtuais ainda sejam uma opção (desde que você tenha uma licença legítima para Windows XP ou um clone do DOS como o FreeDOS instalado na VM), não é possível executar programas DOS nativamente em nenhuma versão recente do Windows, independentemente de você usando o Windows de 32 ou 64 bits.
O chamado subsistema DOS de 16 bits no Windows 7 de 32 bits não era realmente para executar aplicativos DOS, mas para programas de "modo console" (modo de caractere) que não tentavam manipular diretamente a tela.