Sim, você pode fazer isso por meio do GPO. Localize um local de GPO que funcione para você (por exemplo, por site) que atinge todos os computadores que você deseja atingir e vincule um GPO a ele. Coloque um arquivo de lote em Computer Configuration -> Windows Settings -> Scripts (Startup/Shutdown)
. Configure esse arquivo em lotes para executar os comandos route add
que você deseja que os computadores que estão dentro do escopo desse GPO executem.
Também o seu laboratório parece estranho. Um laboratório de testes de 500 hosts, cada um com 4 NICs físicas? Uau.