É possível construir GUI dinamicamente a partir do arquivo Glade usando a classe PyGTK Gtk.Builder
A classe Gtk.Builder oferece a você a oportunidade de projetar interfaces de usuário sem escrever uma única linha de código. Isso é possível descrevendo a interface por um arquivo XML e, em seguida, carregando a descrição XML em tempo de execução e criando os objetos automaticamente, o que a classe Builder faz por você. Para o propósito de não precisar escrever o XML manualmente, o aplicativo Glade permite criar a interface do usuário de uma maneira WYSIWYG (o que você vê é o que obtém)
Veja este é um bom tutorial: Tutorial do Python GTK + 3: 20. Glade e Gtk Construtor
Exemplo:
from gi.repository import Gtk
class Handler:
def onDeleteWindow(self, *args):
Gtk.main_quit(*args)
def onButtonPressed(self, button):
print("Hello World!")
builder = Gtk.Builder()
builder.add_from_file("builder_example.glade")
builder.connect_signals(Handler())
window = builder.get_object("window1")
window.show_all()
Gtk.main()